流式分析仪因其可对单颗粒样品进行高通量多参数分析，已广泛应用于当前备受关注的小颗粒样品分析工作中。当前市场流式细胞仪品类繁多，那么又该如何选择更加适合自己研究项目，特别是适合临床级实验高可靠性要求的流式分析方案呢？

 

近日来自丹麦奥尔堡大学临床医学系和其医院临床生化系的Jaco Botha等研究人员，使用包括英国Apogee Flow公司超灵敏高分辨率纳米流式分析仪A60 Micro-PLUS在内三种不同的流式分析仪系统进行外泌体微囊泡（EVs）可靠性比较分析，包括大小分析定量，荧光标记分析，浓度测定重复性及大量样品重复检测稳定性等[1]，为不同应用场景和不同分析需求，选择最佳分析方案提供了坚实的参考信息。

 

Apogee超灵敏纳米流式分析仪，专为小颗粒分析优化设计，在EVs等小颗粒分析应用工作中，参与发表数百篇文章，充分体现其灵敏度，稳定性和可靠性等性能出众，备受认可。

Jaco Botha等人的研究成果，大量直接对比数据再次体现出Apogee超灵敏纳米流式分析仪：

》》分析<300nm Silica标准微球（相对Polystyrene材质，Silica材质折射率更加接近EVs样品折射率）, 散射光性能更加出众可靠（图1）：可检测出更小的颗粒，更准确的浓度

》》分析不同大小不同材质纳米级标准微球，计数稳定性表现更为突出（图2）：更低的CV数值

》》分析荧光标记EVs样品，同一天/不同天不同批次样品之间，大量样品不同批次总体分析之间，系统分析稳定性同样更为可靠（图3）：更低的变异系数

图1，不同流式分析技术散射光分析不同大小，不同材质标准微球可靠性比较

图2，不同流式分析技术分析不同大小Silica标准微球计数稳定性性比较

图3，不同流式分析技术分析不同大小Silica标准微球计数稳定性性比较

 

部分节选内容参考如下：

 “In line with observations for LoD and LoQ, Apogee A60 Micro-PLUS tended to be more sensitive in detecting small silica nanospheres, scattering very small amounts of light than all other platforms, followed by ImageStream X Mk II and, lastly, FACS Aria III. For larger silica nanospheres, all platforms performed similarly. Finally, results for fluorescent polystyrene nanospheres reflected those for silica nanospheres, where Apogee A60 Micro-PLUS performed better than other platforms in detecting small nanospheres”

 

  “In summary, the Apogee A60 Micro-PLUS demonstrated the overall lowest variabilities in EV concentration determinations, and global and inter-day variabilities did not differ much from intra-day variabilities. The FACS Aria III performed similarly and ex- hibited somewhat increased variabilities in EV concentration determinations compared to the Apogee A60 Micro-PLUS. Finally, although the average concentrations of EV phe- notypes did not differ between analysis days on the ImageStream X Mk II, it presented with the highest intra-day and global variabilities in EV concentrations across EV samples and phenotypes”

 

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参考资料

1. Botha J, Pugsley H R, Handberg A. Conventional, High-Resolution and Imaging Flow Cytometry: Benchmarking Performance in Characterisation of Extracellular Vesicles[J]. Biomedicines, 2021, 9(2): 124.